单克隆抗体的制备过程你会吗

　　单克隆抗体是新一代抗体用于科研、诊断和治疗，兔单抗技术通过用高质量兔单抗来替换多抗或低亲合力鼠单抗产品，来改进难以复制的诊断产品。
 

　　单克隆抗体的出现带来了许多好处。首先，兔抗血清通常含有高亲合力抗体，可以比鼠抗血清识别更多种类的表位。其次，单克隆抗体能够以识别许多在小鼠中不产生免疫的抗原。
 

　　单克隆抗体技术具体过程：
 

　　1、免疫脾细胞的制备
 

　　制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。
 

　　2、骨髓瘤细胞的培养与筛选
 

　　在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性(恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活)。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生。
 

　　3、细胞融合的关键:
 

　　1)、技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。
 

　　2)、融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。
 

　　4、阳性克隆的筛选应尽早进行
 

　　通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次，均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。
 

　　5、克隆化
 

　　克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。